¿Qué es la prueba de endotoxinas?

¿Qué es la prueba de endotoxinas?

Las endotoxinas son moléculas hidrofóbicas que forman parte del complejo de lipopolisacáridos que forma la mayor parte de la membrana externa de las bacterias Gram-negativas.Se liberan cuando las bacterias mueren y sus membranas externas se desintegran.Las endotoxinas se consideran los principales contribuyentes a la respuesta pirogénica.Y los productos parenterales contaminados con pirógenos pueden provocar fiebre, inducción de respuesta inflamatoria, shock, insuficiencia orgánica y muerte en humanos.

La prueba de endotoxinas es la prueba para detectar o cuantificar endotoxinas de bacterias Gram-negativas.

Al principio se emplean conejos para detectar y cuantificar endotoxinas en productos farmacéuticos.Según la USP, el RPT implica monitorear el aumento de la temperatura o la fiebre después de la inyección intravenosa del fármaco en conejos.Y 21 CFR 610.13(b) requiere una prueba de pirógenos en conejo para productos biológicos específicos.

En la década de 1960, Fredrick Bang y Jack Levin descubrieron que los amebocitos del cangrejo herradura coagulaban en presencia de endotoxinas.ElLisado de amebocitos de Limulus(o lisado de amebocitos taquipleus) se desarrolló en consecuencia para reemplazar la mayoría de los RPT.En la USP, la prueba LAL se conoce como prueba de endotoxinas bacterianas (BET).Y la BET podría realizarse mediante el uso de 3 técnicas: 1) la técnica del gel-clot;2) la técnica turbidimétrica;3)la técnica cromogénica.Los requisitos para la prueba LAL contienen pH, fuerza iónica, temperatura y tiempo de incubación óptimos.

Comparado con RPT, BET es rápido y eficiente.Sin embargo, BET no pudo reemplazar completamente a RPT.Porque el ensayo LAL puede verse interferido por factores y no puede detectar pirógenos que no sean endotoxinas.